序列的捕获探针可从获得。义的差异表达进行验证分析。选定的在由原始发现队列和外部队列组成的组合队列中进行了验证在上使用检测检测检测检测检测检测遵循制造商的说明。简而言之使用特异性逆转录酶引物对总进行逆转录的逆转录酶反应用于使用×和以下循环条件的反应°分钟°秒和°秒的个循环。所有样品均一式三份进行。
使用通过相对于参考基因的方法分析结果
细胞培养人细胞细胞系获自美国典型培养物保藏中心并在加湿室°中在补充有胎牛血清的改良营养混合物液体中培养。确认细胞不含支原体。抗人类抑制剂的转染一旦达到汇合使用用抗拮抗剂抗或抗阴性对照抗反向转染细胞。将μ中的抗或抗终浓度为μ与每孔μ在中稀释倍混合在室温下孵育分钟然后添加到孔板μ的每个孔中。随后将细胞×个细胞μ添加至每个孔中。孵育转染混合物°小时。小时后细胞要么立即用于测定要么更换培养基并进
一步孵育使用标记的抗确定转染效率为
细胞增殖测定使用细胞增殖测定评估细胞活力。如上所述培养细胞。将孔板中的μ培养基中的每孔个细胞用抗或抗反转染。转染后小时将μ添加至每个培养孔中孵育一小时然后使用孔板读数器记录处的吸光度。选择小时时间点是因为我们的实验室此前已成功使用该技术。细胞死亡和细胞周期分析分别使用膜联蛋白荧光素异硫氰酸酯细胞凋亡检测试剂盒和碘化丙啶测定进行细胞死亡和细胞周期研究。对于细胞死亡研究如上所述转染后小时将细胞用胰蛋白酶消化用洗涤两次并以×个细胞的浓度重悬于×结合缓冲液中。
